1，我怎样才能阻止唾液酸从聚糖上脱落?
唾液酸是个棘手的东西。根据我们的经验，聚糖样品越纯净唾液酸残留物就越容易脱落。以下是一些明智的预防措施:
避免酸性pH值和高温的结合。尽可能保持pH值在6-9之间，温度在30℃以下。
用离心蒸发或旋转蒸发干燥聚糖样品时要小心。当您使用这些程序时，尽量将温度保持在25℃以下，冻干(冷冻干燥)在唾液酸降解方面可能更安全，但使用这种技术时，当真空释放时，整个样品丢失的危险更大。
2，定量唾液酸释放和DMB标记试剂盒
如果我不用所有的试剂，我能储存它们吗?
一般情况下，我们不建议储存剩余的溶液，因为我们无法保证储存后的化学质量。储存这种溶液通常风险太大的原因是它含有两种还原剂和一种光敏染料的混合物——如果这种溶液不受空气(空气中的氧气与还原剂发生反应)和光线的影响，那么标记反应的效率将受到影响，结果数据的质量将受到影响。由于这种混合物是在一个安瓿中——这是在惰性气氛下运输和储存所必需的——并且现在已经破裂，除非您转移溶液，否则没有办法重新密封——我们认为这种风险太大，而且不同实验室之间的过程可能变化太大，因此不建议我们的客户将其作为最佳实践。
X缓冲液会干扰我的分析吗?
一些通常用于蛋白质的盐/缓冲液可能会干扰唾液酸分析过程。这取决于取样量与缓冲液体积的比较(因为在酸水解过程中，大量的缓冲液会影响溶液的酸度)。根据我们的经验，当样品浓度高于1mg/mL，样品在50到200µg之间进行分析时，缓冲液(如PBS)不是问题。这将需要对每种样品类型进行测试，我们建议也将缓冲液空白带到该过程中，以确定缓冲液中是否有任何成分会干扰唾液酸的定量。
在我的蛋白质中加入酸后，我得到了胶状溶液，你能帮忙吗?
我们以前在两种情况下看到过这种情况:1)当样品中的蛋白质含量过高时，酸处理后可能会得到浓溶液。我们能够通过使用较少的起始材料来解决这个问题(您可以使用50-200µg起始材料进行检测)。因此，如果您发现在LC上运行样品时信号太低，请不要在注射前稀释它们。2)某些缓冲液也会导致浓溶液。我们的解决方案是在酸释放之前将缓冲液交换到水中。我们使用分子量为10 kDa的vivaspin柱子进行缓冲液交换。
在样品水解过程中，你观察到唾液酸有一些降解吗?
我们为DMB试剂盒建议的条件是使用现有的科学文献作为起点开发的。唾液酸通过温和的酸水解(2M醋酸，80°C, 2h)从糖蛋白中释放出来，条件是保留n -乙酰基，n -乙醇基和o -乙酰基。我们寻找唾液酸释放和最小降解(唾液酸和乙酰基)之间的最佳平衡。对我们来说，保持乙酰基并限制它们的迁移是很重要的，因为我们的客户经常对Neu5、9Ac2和其他乙酰化物种的相对丰度感兴趣。
我的样本是IgG型样本，唾液酰化水平很低。因此，在不改变试剂盒中试剂体积的情况下，我可以使用的最高样品浓度是多少?
我们对igg型样品进行了唾液酸分析，我们使用50µg到1 mg的起始材料。对于该类型的样品，起始物料的最佳用量为200-600µg(验证研究中样品用量范围的线性比例)。我们发现没有必要增加任何试剂的体积。此外，如指南中所示，如果样品中的唾液化程度较低，则可以在LC上不稀释地运行样品。
方案建议将蛋白溶解在25µL的2M醋酸溶液中，只转移5µL，为什么会这样?
这样设置实验是为了在第一步确保最大的溶解度和效率(试图在5µl中溶解某些东西而加热是不可行的)。在此之后，在DMB标记后，您只需要该样品的一部分在FLR-LC上有足够的响应，因此只需要5µL的部分。
我们使用了一罐胎球激素，并对样品进行了引用，这样我们就有了三份副本，但是我们的结果低于接受标准，你能帮忙吗?
我们之前尝试过从一个小瓶中提取胎儿标准品，我们的数据也很差。最好的做法是不要将这些标准等同起来，而是按提供的方式使用它们。这是确保样品不丢失的唯一方法。
您是否将此方法应用于复杂的环境，如配方缓冲液?
我们已经在许多配方缓冲液中使用了这种方法，但还没有遇到问题。无论如何，我们总是运行一个缓冲空白，以确定是否有任何潜在的干扰物种。
GPEP和Fetuin标准品有什么区别? 我该如何为我的实验选择一个呢?
胎球蛋白是一种同时具有NANA和NAGA的糖蛋白。我们的实验室已经使用DMB分析对该标准品进行了很好的研究，我们已经根据几年的历史数据设置了验收标准-随着我们收集到越来越多的关于该标准品的数据，该标准品正在不断地被监测和更新。
GPEP是一种双链二二化聚糖的糖肽。这是一种纯化的均质糖肽，已使用qNMR进行了定量分析。接受标准是基于此qNMR值设置的。
这两种标准各有利弊。Fetuin是一种糖蛋白，它可能比糖肽更符合你自己的兴趣样本，然而，糖肽是一种更可靠的量化方式(因为它是一个更小的分子，可以进行核磁共振)。此外，胎儿素含有两种唾液酸——这对你来说可能是一个重要的方面，而GPEP只有NANA。您将需要评估什么对您的分析是重要的-我们总是使用两者，但这是您需要根据您的具体情况做出的选择。
DMB过程中哪些步骤对错误敏感?
在需要考虑的敏感步骤方面-当我们在内部或客户服务中使用此试剂盒时，通常会出现以下问题:
准确地从酸释放步骤转移5ul样品用于标记实验。由于传输的体积很小，因此应相当小心
加入标记试剂后，样品混合均匀
也许最有可能影响定量的步骤是准备LC样品进行分析的时候。这些必须小心准备和混合非常好，以确保均匀的溶液注入到LC
此外，一般来说，保护标记的样品免受暴露在光线下的降解是很重要的，只要它们没有长时间放置在外面，它们就应该是好的，这很容易识别，因为样品往往会变成粉红色
为什么要运行三份样品?
为了确保我们拥有的数据是可信的，我们总是运行三份副本。特别是在定量分析中，很容易出现一定程度的操作误差——例如在这个分析中，转移5ul用于标记是一个捏点。它允许分析师快速查看是否存在异常值
血清唾液酸（SA）是细胞膜的重要组成成分，参与细胞的识别、粘着和接触抑制，是一种广谱的肿瘤标志物。当正常细胞转化为恶性肿瘤细胞时，水解细胞膜糖蛋白，唾液酸释放入血，使得血清唾液酸含量升高，测定其水平高低对恶性肿瘤的辅助诊断、疗效观察及预后判断有重要意义。
血清唾液酸含量与恶性肿瘤细胞的增殖、转移、浸润、细胞粘附性降低等密切相关，患恶性肿瘤时，由于肿瘤细胞表面糖蛋白和糖脂的结构和含量发生明显变化，多量的SA可能从癌细胞表面脱落进入血液，致使血清SA水平升高，常见于肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌等。
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